ELISA試劑盒檢測不成功的原因及解決方案

　　1. ‌低信號強度(靈敏度不足)‌

　　可能原因‌：

　　抗原/抗體濃度不足或孵育時間過短‌。

　　酶標記物(如HRP)失活或底物(如TMB)避光不當‌。

　　解決方案‌：

　　延長抗體孵育時間(如4℃過夜)或增加酶標記物濃度‌。

　　顯色反應嚴格避光，避免底物降解‌。

　　2. ‌高背景信號‌

　　可能原因‌：

　　封閉不充分(如BSA或脫脂牛奶封閉時間不足)‌。

　　洗滌不凈(殘留未結(jié)合的酶或底物)‌。

　　解決方案‌：

　　延長封閉時間(≥30分鐘)并確保洗滌液充分浸泡孔內(nèi)‌。

　　控制溫育溫度(37℃±0.5℃)，避免蒸發(fā)導致濃度異常‌。

　　3. ‌重復性差(復孔差異大)‌

　　可能原因‌：

　　加樣量不一致或移液器未校準‌。

　　孵育時間/溫度波動(如頻繁開蓋)‌。

　　解決方案‌：

　　使用校準后的移液器，同步加樣時間‌。

　　使用恒溫箱并減少開蓋次數(shù)‌。

　　4. ‌樣本問題‌

　　可能原因‌：

　　樣本溶血、反復凍融或細菌污染‌。

　　保存條件不當(如未分裝導致反復凍融)‌。

　　解決方案‌：

　　離心后取上清，避免溶血干擾;分裝保存于-80℃‌。

　　短期檢測樣本可4℃保存，長期需凍存‌。

　　5. ‌操作流程問題‌

　　可能原因‌：

　　顯色時間不足或過長(超出說明書范圍)‌。

　　試劑污染或過期(如酶標板未密封)‌。

　　解決方案‌：

　　嚴格按說明書控制顯色時間(通常10-15分鐘)‌。

　　使用新鮮試劑，避免交叉污染(如更換吸頭)‌。

　　6. ‌其他干擾因素‌

　　溫度波動‌：水浴或恒溫箱需預熱至平衡溫度，避免疊放微孔板‌。

　　時間差異‌：大批量樣本建議分批操作，減少操作時差‌。

　　通過優(yōu)化上述環(huán)節(jié)，可顯著提高ELISA檢測的準確性和重復性‌。

　　注：以上資料供參考，不作為實驗依據(jù)，如需具體產(chǎn)品說明請咨詢技術老師或品牌供應商。

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